Resumo. A pimenta de macaco (Piper aduncum) é uma espécie nativa da Amazônia, que possui grande potencial econômico em razão de o seu óleo essencial conter substâncias bioquímicas com propriedades fungicida e inseticida. Seu cultivo é sustentável, podendo ser explorado de forma não destrutiva e renovável. Com a crescente demanda para a produção de óleo essencial dessa espécie, existe a necessidade da implantação de cultivos comerciais, e com isso se tem como limitação a oferta de mudas em quantidade e com qualidade. A produção de mudas em laboratório por meio da micropropagação supre tal necessidade, já que permite a obtenção de material isento de doenças e em larga escala. O objetivo deste trabalho foi verificar os parâmetros necessários para o cultivo in vitro de sementes dessa espécie. Foram realizados três experimentos: germinação e crescimento inicial, multiplicação e enraizamento in vitro. Foram utilizados os meios de cultura MS e WPM em diferentes concentrações salinas. Para multiplicação in vitro foram testadas quatro citocininas em cinco diferentes concentrações, e para o enraizamento in vitro foram utilizados três tipos de auxinas em seis diferentes concentrações. Todas as variáveis foram submetidas à análise de variância e, quando o valor de F foi significativo, utilizou-se a comparação das médias pelo teste de Tukey ao nível de 5% de probabilidade de erro, para tratamentos qualitativos. Já para os tratamentos quantitativos, foi realizada análise de regressão polinomial ao nível de 5% de probabilidade de erro. Verificou-se que a germinação in vitro das sementes de P. aduncum deve ser realizada se utilizando sais do meio MS; para a multiplicação e o enraizamento in vitro não é necessária a adição de reguladores de crescimento nesse meio, provavelmente os níveis endógenos desses reguladores nos explantes são suficientes para suprir suas necessidades de crescimento e desenvolvimento. Observou-se também que a utilização de citocininas propicia o aparecimento de calos na base dos explantes.