Resumo. Em um estudo preliminar de avaliação da atividade antimicrobiana, um isolado de Streptomyces caracterizado como linhagem 1S foi selecionado em decorrência do seu alto potencial como produtor de metabólitos bioativos. Este isolado apresentou um amplo espectro de atividade inibindo 46 dos 54 microrganismos-alvos (bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, leveduras e fungos filamentosos). No presente estudo, foi avaliada a influência das condições ambientais como meio de cultivo, temperatura de incubação, cultivo estático ou com agitação e tempo de crescimento para a produção de moléculas bioativas. Para tanto, foram utilizados sete meios de cultura: caldo amido caseína (AC); caldo Czapeck Dox modificado (CPD); meio proposto por Sahin (S); meio Bennett´s (B); caldo nutritivo (CN); meio extrato de malte e levedura (ISP2) e caldo tripticaseina de soja (TSB). As temperaturas avaliadas foram 28, 30, 35 e 40 °C. Para cada um dos ensaios foi determinada a atividade antimicrobiana, o pH e a biomassa celular. Das condições de cultivo avaliadas, a melhor atividade antimicrobiana foi observada nos extratos provenientes do crescimento de Streptomyces sp. 1S no meio de cultura ISP2, a uma temperatura de 28 °C e com 96 horas de cultivo. Nestas condições, o isolado inibiu 15, dos 17 microrganismos-alvo empregados neste estudo, incluindo microrganismos multirresistentes como Staphylococcus aureus MRSA, Enterococcus sp. e  Salmonella enterica subsp. enterica Enteretidis. Palavras-chave: Streptomyces. Atividade antimicrobiana. Resistência.  Compostos bioativos.