Resumo. Arbovírus são transmitidos por mosquitos e carrapatos, causando doenças graves em humanos, como dengue, Zika, Chikungunya e febre amarela. Este estudo buscou padronizar a técnica de RT-qPCR para detecção desses vírus em amostras de tecidos parafinados. Foram utilizadas 45 amostras parafinadas, incluindo arbovírus em estudo e amostras de controle negativo, provenientes de diferentes períodos e tecidos, catalogadas pelo Instituto Evandro Chagas. A padronização da técnica de RT-qPCR é essencial para a vigilância epidemiológica de arbovírus na região amazônica e no Brasil. Os resultados demonstraram eficiência na detecção e quantificação do genoma viral dos diferentes arbovírus. A técnica de RT-qPCR se mostrou uma ferramenta importante para o diagnóstico diferencial em amostras de tecidos parafinados. Essa padronização é relevante para o monitoramento e controle efetivo das doenças transmitidas por arbovírus, contribuindo para a saúde pública e a prevenção de surtos. Este estudo ressalta a importância da padronização da técnica de RT-qPCR para detecção de arbovírus em amostras de tecidos parafinados. A região amazônica e o Brasil são áreas propensas a surtos dessas doenças, tornando esses avanços ainda mais significativos. A detecção precoce e precisa dos arbovírus permite a implementação de medidas de controle e prevenção mais eficazes, além de contribuir para a compreensão da epidemiologia dessas doenças.