Resumo. A lesão muscular esquelética é um evento frequente entre os atletas. O diagnóstico utilizando os marcadores sanguíneos clássicos às vezes produz resultados insatisfatórios em razão da grande variabilidade interindividual. Portanto, a identificação de biomarcadores confiáveis e agudos é importante. Neste estudo verificou-se a atividade sérica, salivar e urinária de marcadores bioquímicos indicadores de lesão musculoesquelética em resposta ao dano muscular agudo induzido por exercício físico intenso. Realizou-se um estudo transversal com 27 jogadores de futebol americano com idade média de 22,5 anos. Os atletas foram submetidos a um questionário antes da realização da atividade física e em seguida realizou-se a avalição de parâmetros clínicos. Antes dos exercícios físicos intensos (T0), 60 minutos (T1) e 24 horas (T2) após o treinamento foram coletadas por punção venosa amostras de sangue que foram acondicionadas em tubos com anticoagulante (heparina) e sem anticoagulante, e posteriormente foi determinada a atividade das enzimas Creatina Quinase (CPK), Adenosina deaminase (ADA), aldolase, Lactato desidrogenase (LDH), Transaminase Glutâmica Oxalacêtica (TGO) e Transaminase Glutâmica Pirúvica (TGP) em amostras de soro, saliva e urina, além da concentração das Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico (TBARS). Observou-se um aumento significativo da atividade da aldolase, ADA e CPK no soro, da aldolase na saliva e ADA, CPK, TGO e TGP na urina. Também houve um aumento sugnificativo do TBARS salivar e urinário após exercício físico intenso. Em conjunto, os resultados mostraram que a atividade da ADA sérica e urinária, TBARS urinário e salivar, aldolase salivar e TGO e TGP urinário (p<0.01) poderiam ser biomarcadores eficazes e promissores de lesão muscular aguda, permitindo uma avaliação rápida de lesões induzidas pelo exercício físico intenso e fadiga muscular, contribuindo para o monitoramento de atletas e dessa forma, para evitar lesões mais graves e afastamento dos atletas. Palavras-chave: Lesão muscular. Exercício físico. Biomarcadores. Atletas.