Resumo. O presente trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo de micropropagação de Pinus taeda L. Brotações apicais de plântulas de cinco dias de germinação, de diferentes genótipos (F27, B05 e PC) foram cultivadas em meio de cultura WV5, acrescido de 44 μM de 6-benzilaminopurina (BAP) e de 0,05 μM de ácido α-naftalenoacético (ANA) durante 14 dias, seguido de quatro subcultivos para meio sem reguladores de crescimento. Explantes foram seccionados em brotações apicais e segmentos nodais para a multiplicação. Foram testados comprimentos diferentes dos explantes, concentrações de BAP e períodos de cultivo. O enraizamento foi induzido em meios de cultura WV5/2, WV3/2, GDm/2 e ágar-água, acrescidos de 2,68 μM de ANA e 0,44 μM de BAP, pelo período de nove dias, seguido de subcultivo para as mesmas formulações, sem reguladores por quatro semanas. Verificou-se que o genótipo influenciou a formação de brotações e enraizamento. O comprimento de 1,0 cm é recomendado para os segmentos nodais produzirem o maior número de brotações axilares. Para brotações apicais, os explantes de 0,5 cm cultivados em meio de cultura WV5 apresentaram melhores resultados de alongamento. O melhor período de subcultivo foi oito semanas, tanto para os segmentos nodais como brotações apicais. A maior percentagem de segmentos nodais com brotações (99,2%) e o maior número médio de brotações por explante (4,0) foram obtidos com o genótipo F27, em meio de cultura contendo 2,5 μM de BAP. Para brotações apicais, o melhor resultado para alongamento foi observado com explantes menores (0.5 cm) em meio de cultura WV5 (218,3%). A manutenção de microjardim clonal in vitro de brotações vigorosas foi obtida por dois anos em meio de cultura WV5, com subcultivos de oito semanas. O melhor resultado de enraizamento (55,6%) ocorreu com indução por nove dias em meio ágar–água com 2,68 μM de NAA e 0,44 μM de BAP. A aclimatização de mudas foi bem sucedida (85% de sobrevivência), de modo que foi estabelecido um protocolo de produção de mudas por micropropagação.