Resumo. As formigas cortadeiras são pragas que podem causar sérios prejuízos para a agricultura e silvicultura, uma vez que elas possuem o hábito de cortar material vegetal fresco para cultivar o fungo simbionte, sua principal fonte alimentar. Atualmente, métodos químicos têm sido largamente empregados para o controle de formigas cortadeiras e isso tem acarretado sérios problemas à saúde humana, assim como para o meio ambiente e outros organismos não-alvo. Nesse sentido, espécies vegetais são promissoras fontes de novas moléculas inseticidas que podem ser tóxicas tanto para as formigas cortadeiras quanto para o fungo simbionte, além de serem mais degradáveis e menos tóxicas para mamíferos. Em vista disso, o presente estudo objetivou a determinação da toxicidade de extratos, frações e substâncias puras de Helietta puberula RE Fr. (Rutaceae) para operárias médias de Atta sexdens L. (Hymenoptera: Formicidae) e para o seu fungo simbionte, Leucoagaricus gongylophorus (Singer) Möller. A toxicidade para as saúvas foi determinada através de bioensaios por ingestão, enquanto que com o fungo simbionte, foi avaliado o seu desenvolvimento em meio de cultura contendo os extratos vegetais. Os resultados mostraram que dentre as seis substâncias isoladas de H. puberulla, três delas foram concomitantemente tóxicas para as saúvas e para o fungo, mostrando ser essa espécie vegetal uma fonte promissora de novas substâncias para o controle de formigas cortadeiras.